NY∕T 3307-2018 动物毛纤维源性成分鉴定 实时荧光定性PCR法(农业)
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ID： |
49DCEA38FE254CA28EED56AA8F1292A2 |
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文件大小(MB)： |
0.65 |
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页数： |
13 |
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日期： |
2021-12-24 |
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ICS 59.140.20,X45 NY,中华人民共和国农业行业标准,~/T 3307--2018,动物毛纤维源性成分鉴定,实时荧光定性PCR法,Identification of animal- derived materials in wool fibers一,Qualitative reaItime PCR method,2018-12-19 发布2019-06 - 01 实施,?二中华人民共和国农业农村部发布,前言,本标111 按照GB! T 1. 1-2009 给出的规则起草.,本标111 由农业农村部畜牧兽医局提1-1\ ,本标叫i 由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/ TC 274) 归口,本标准起草单位山东省农业科学院生物技术研究中心,NY!T 3307-2018,本标准主要起草人:张全芳、主1) 艳艳、范阳阳、1扭j 悦、马德源、王俊燕、李费、杨雪、.~'I II古时i 、陈雪~l!~、刘,国(1)、步迅、王兴军,I,NY/T 3307- 2018,动物毛纤维源性成分鉴定实时荧光定性PCR 法,范围,本标准规定了对水貌、狐狸、兔、骆驼、山羊、绵羊、鸭和鹅8 利'动物毛纤维iEl性成分进行鉴定的实时,荧光定性PCR 法,本标阳日子动物毛纤维中喝画画踊谢谢蘸蜘238 阳、性成分的定性检测,本方法检:J:l限为1 % ,2 规范性引用文件,下列文件对,件。凡是不注日期,GB/ T 6682,GB/ T,3,3. 2,4 原理,根据线粒体16,采用TaqMan,犯、兔、骆驼、山羊、绵羊、,5 试剂或材料,、..,除另有规定外，仅使用分析纯试剂,5. 1 水， GB/ T 6682 ， 一级,进行定,特异性探针,阔值，要1)定水貌、狐,5.2 1 mol/ L Tris - J-IC1(p J-I 6 . 4) 溶液:称Jt且12 . 1 g Tris fl.于1 00 mL 烧杯中，加入80 mL 水，用浓,HCl 调节p [-[ 至6.4 ， jJII水定容至100 mL, 103. 4 kPa 蒸汽压021 'c)灭菌2 0 min ，室温保存待用,5.3 1 mol/ L Tris - J-IC1(pJ-I 8 . 0) 溶液称以12. 1 g Tris 置于1 00 mL 烧杯中，加入80 mL 水，用浓,[-[ Cl 调节p H 至8 .0 ，加水定容至100 mL, 103.4 kPa 蒸汽压0 21'C) 灭菌2 0 min ， 室温保存待用,5.4 0. 5 mol/ L EDTA(pJ-I 8 .0) 溶液:称Jlil. 18.61 g Na, EDTA ?2H 2 0 置于100 mL 烧杯中，加入,80 mL水， HJ 10 % 的NaOH 榕液，调节p I-[ 至8 . 0 ，加水定容至100 mL, 103. 4 kPa 蒸汽压02 1 'C) 灭菌,20 min. 窒源保存待用,NY/T 3307- 2018,5.5 1 0%十二烧基硫酸俐。DS) 溶液:称取10 g SDS 溶解于80mL 无菌水中， j111水定容至100mL。储,存于灭茵过的容器中待用,5. 6 5 mol/ L NaCI 溶液:称取2 9 .2 2 g NaCI 溶解于80 mL 无菌水中，加水定容至100 mL, 103. 4 kPa,蒸汽压Cl 2 1 "C) 灭菌20 m蝞 ，室温保存待用,5. 7 细胞裂解液CLysis Buffer) 取1 mol/ L Tris - I-ICI C pI-l 8 . 0 ) 浴液20 mL, O. 5 mol/ L EDT A C pI-l,8 . 0 ) 溶液5 mL, 5. 0 mol/L NaCI 浴液10 mL, 10% SDS 浴液5 mL ， j1U水定容至1 00 mL ，混匀,5.8 20 mg/ mL 蛋白酶K 溶液，准确称量0 . 2 g 蛋白酶冻干品， jJD无菌水溶解，加水定容至1 0 mL ，分装,后于- 20"C 保存,5.9 RNA 酶浴液将1 g r!i丁干品RNA 酶A 溶解于6 mL 元菌水中，于1 00"C 加热1 5 min ，缓慢冷却至,室温，力11水定容至10mL ，分装成小份存于一20"C ,5. 10 1 mo l/ L 二硫苏:f1.lfe'j: CDTT) 准确称盐1. 543 g DTT, j1ll人6 mL 7./(溶解， jJU水定容至10 mL ，分,装后于20'C保存,5. 11 5 % Chelex - 1 00 树脂粉取5 g Chelex - 1 0 0 树脂，浴解于1 00 mL 水中,5. 12 硅珠悬浮液取5 g 的硅l快加入到20 mL 的水中充分混合，静止24 h ，弃掉上消液，然后再加入,20 mL的水中充分混合，再静止5 h ，弃掉上清液。在沉淀的硅珠中加入5 mL 的水，再加入5 μL 的浓盐,殴， 充分混合，调节p I-l 至2. 0 ,5. 13 DNA 结合液CBinding Bu[[cr) ，称取60 g 异硫低自主JliIICGUSCN) ，加入5 mL 1 mol/ L Tris - HCI,CpH 6. 4) 溶液，再加入8 mL O. 5 mol/ L EDTACpI-l 8. 0 ) 浴液， 再加入4mL 聚乙二醇辛基苯舿隧CTri,tion X - 100) (温度在60"C) ，加水定容至100 mL ,5. 14 擦洗液CWashing 遳ffer) ，粉取60 g 异硫鴆酸腻，如l人5 mL 1 mol/ ……
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